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冷凍切片技術在TEM樣品制備中的關鍵作用
來源: 時間:2023-12-04 15:48:30 瀏覽:2332次

冷凍切片技術在TEM樣品制備中的關鍵作用

 

冷凍切片技術是一種在超低溫條件下對樣品進行切片的方法,它能夠保持樣品的原始形態和結構,從而為TEM提供了高質量的觀察材料。

 


 

一、技術原理

冷凍切片技術是利用液氮或液氦將樣品快速冷卻至低溫,使水分迅速凝固,從而使組織或細胞結構固定并保持原始形態,在冷凍過程中,樣品中的水分會形成冰晶,這些冰晶可以在一定程度上支撐和保護細胞結構,防止其在切片過程中受到破壞。

 

二、制樣流程

1. 樣品采集:采集新鮮的生物組織或細胞樣品,盡量減少樣品擱置時間,以保持其原始狀態。

2. 固定:將采集好的樣品用固定劑進行固定,如戊二醛、多聚甲醛等,以保持細胞結構。

3. 清洗:將固定好的樣品用PBS緩沖液進行清洗,去除多余的固定劑和雜質。

4. 脫水:將清洗后的樣品用不同濃度的酒精或丙酮進行梯度脫水,以去除樣品中的自由水。

5. 滲透:將脫水后的樣品用包埋劑(如環氧樹脂)進行滲透,使其充滿整個樣品。

6. 包埋:將滲透后的樣品用樹脂進行包埋,使其具有足夠的硬度進行切片。

7. 切片:使用冷凍切片機將包埋好的樣品切成薄片,一般厚度為4-20μm

8. 貼片:將切好的切片粘貼到處理好的載玻片上,使其平整均勻。

9. 干燥:將貼好的切片進行干燥處理,一般采用室溫干燥1小時。

10. 染色:根據需要,對切片進行染色,如使用金屬鹽類進行電子染色。

 

三、在TEM中的應用

冷凍切片技術在TEM樣品制備中具有重要作用,其主要體現在以下幾個方面:

1. 保持原始形態:冷凍切片技術能夠保持樣品的原始形態和結構,使TEM觀察更加準確。

2. 提高樣品質量:冷凍切片技術可以減少樣品在制備過程中的損傷,提高TEM樣品的質量。

3. 廣泛應用于生物學領域:冷凍切片技術廣泛應用于生物學領域,如研究細胞結構、脂肪、神經組織等。

4. 快速制片:冷凍切片技術具有快速制片的特點,有利于臨床診斷和科學研究。

 

通過冷凍切片技術制備的樣品,可以保持原始形態和結構,為TEM提供了高質量的觀察材料,隨著冷凍切片技術的發展,其在生物學、醫學等領域的研究將越來越廣泛,然而,冷凍切片技術也存在一些挑戰,如對設備和技術要求較高,操作過程中需要嚴格控制溫度和濕度等;因此,進一步優化冷凍切片技術,提高其制備樣品的質量和效率,是當前研究的重要方向。

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全部 3小時前 四川
文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具?,F代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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