激光掃描共聚焦顯微鏡的基本原理與應用
激光掃描共聚焦顯微鏡(Confocal laser scanning microscope,CLSM)是近代最先進的細胞生物醫學分析儀器之一。它是在熒光顯微鏡成像的基礎上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激光熒光探針,利用計算機進行圖像處理,不僅可觀察固定的細胞、組織切片,還可對活細胞的結構、分子、離子進行實時動態地觀察和檢測。激光掃描共聚焦顯微技術已用于細胞形態定位、立體結構重組、動態變化過程等研究,并提供定量熒光測定、定量圖像分析等實用研究手段,結合其他相關生物技術,在形態學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域得到廣泛應用。
生物樣品:
1. 請先在熒光顯微鏡下觀察熒光表達是否正常,以確定是否有必要使用激光共聚焦;
2. 蓋玻片厚度要求≤0.17mm;
3. 明確激發波長和發射波長;
4. 重構的需要明確掃描區域大小,位置,Z步進,這些參數會影響測試時間;
5. 共聚焦要的標本一定要貼壁很好,不能懸浮起來,需要自己在載玻片上固定好后送樣測試;
6. 做顯微成像,樣品需要加抗熒光淬滅劑,蓋玻片需要固定。
材料樣品:
1. 主要測試偏材料的樣品,樣品提前制備好,如果有需要請提前聯系是否可以幫忙制樣;
2. 拍出來最大面積為1.11x1.8mm到5x5mm范圍內,顏色可調。最大面積需要多張圖拼接而成,若需要最大面積,則需多次拍攝;
3. 尺寸沒有要求,平整就行;
4. 一般白光拍攝材料樣品,只提供2-3張圖片,若需更多圖片,請提前協商。
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激光共聚焦顯微鏡(CLSM)