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細胞毒性/增殖

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項目介紹

細胞增殖及毒性檢測是生物相容性測試的一種，檢測藥物或者新型材料在生物環境中的毒性情況，即通過檢測材料或者藥物對細胞的增殖或者生長的影響，來評價藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、抗腫瘤藥效測定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測。

操作流程：

（1）收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度3x104  ~5x104 個/mL；

（2）96孔加入細胞懸液，100ul/孔，邊緣用pbs填充，5%CO2 、37℃孵育；

（3）培養24h后給藥，設置3~6個復孔，5%CO2 、37℃孵育；

（4）孵育適當時間后，棄舊液，用無血清培養基與CCK8按照10:1稀釋200ul/孔/無血清培養基與MTT按照9:1稀釋，200ul/孔，繼續培養至所需時間點；

（5）CCK8: 時間到后，酶標儀450nm/處測量各孔的吸光值。

客戶提供：

（1）足量樣品、樣品信息（如細胞類型、分子量、溶解性、穩定性、保存條件等）；
（2）相關實驗設計內容（如樣品作用時間、濃度等、細胞株等）。

樣品要求

1.待測樣品（濃度用戶指定）、實驗方案、相關細胞、試劑盒及生物耗材等，平臺可有償提供。

項目案例

常見問題
1、MTT法檢測細胞活性原理

在活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將外源性MTT還原為不溶于水的藍紫色甲臢化合物，用二甲基亞砜（DMSO）將其溶解成溶液，用酶標儀測定其濃度（OD490或者570)，從而定量測定細胞的存活比例，細胞增殖越多越快，對應的吸光度越高；細胞毒性越大，對應的吸光度越低。

2、CCK8法檢測細胞活性原理

CCK-8細胞活性檢測試劑中含有WST-8 —— 一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以為線粒體內的脫氫酶驗明正身。在脫氫酶作用下，WST-8被還原生成橙黃色的甲瓚產物，用酶聯免疫檢測儀在OD 450nm波長處測定其光吸收值。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。

3、相較于MTT法，CCK8試劑盒的優點有哪些？

1.使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；

2.CCK-8法能快速檢測；

3.CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細胞密度；

4.CCK-8法的重復性優于MTT 法；

5. CCK8適用于貼壁細胞和懸浮細胞；如樣品容易沉淀或殘留且易溶于DMSO，建議選用CCK8法檢測。

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