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免疫電鏡測試（IEM）

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免疫電鏡測試（IEM）

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項目介紹

免疫電鏡技術是組織樣品經低溫脫水滲透LR White樹脂低溫聚合包埋，超薄切片70-80nm，用特異性一抗與待檢測抗原結合然后用帶有膠體金標記的二抗與一抗抗原復合物結合，在電子顯微鏡下觀察，由于二抗上的膠體金形成一定的電子密度而精確指示出相應抗原在亞細胞水平上的定位。

樣品要求

免疫電鏡技術成功的關鍵是：①對細胞超微結構的完好保存；②保證被檢細胞或其亞細胞結構的抗原在原位，其抗原性不受損失；③選擇的免疫試劑能順利穿透組織細胞結構與抗原結合。該技術主要用于病毒、細菌等抗原定位、免疫性疾病的發病機理及超微結構免疫細胞化學研究等。

具體操作方法1、1-3min內取樣，取樣組織1mm3大小。取材前可提前準備裝有免疫電鏡固定液A液的培養皿，將小組織塊離體取下后立即投入培養皿內，用手術刀在培養皿的固定液中進行切割成1mm3的小組織塊。再將切割好的小組織塊轉移至裝有新的免疫電鏡固定液的EP管內繼續固定。 2、取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質;觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚，腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。 3、取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。 4、組織取下后立即投入免疫電鏡專用固定液，4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。樣品固定后應盡快安排做后續包埋和免疫標記實驗，減少抗原丟失的可能性。5、結果觀察圖像采集：在透射電子顯微鏡下觀察并采集圖像，黑色10nm大小的金顆粒即為陽性表達。

項目案例