国产主播欧美精品,在线视频cao,中文字幕免费一区二区,日韩三级影视

預(yù)存
Document
當(dāng)前位置：文庫(kù)百科 ? 文章詳情
如何進(jìn)行冷凍切片檢測(cè)？步驟詳解
來(lái)源： 時(shí)間：2024-12-16 10:14:43 瀏覽：1493次

如何進(jìn)行冷凍切片檢測(cè)？步驟詳解

 

冷凍切片檢測(cè)是一種在病理學(xué)和生物科學(xué)研究中廣泛使用的技術(shù)，它允許快速制備組織樣本以進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析、免疫組化或免疫熒光等實(shí)驗(yàn)。

以下是詳細(xì)的步驟介紹，包括從取材到分析的整個(gè)過(guò)程：

1. 取材與速凍

新鮮取材：迅速?gòu)纳矬w中獲取組織樣本，以減少死后變化對(duì)組織結(jié)構(gòu)和抗原活性的影響。

組織處理：將組織塊平放于特制容器內(nèi)，如軟塑瓶蓋或小盒，直徑約2cm，對(duì)于小組織塊可加入OCT（Optimal Cutting Temperature）包埋劑，以保持組織形態(tài)。

速凍：使用液氮或干冰-丙酮混合物快速冷凍組織，確保組織迅速冰結(jié)成塊，減少冰晶損傷。

2. 切片準(zhǔn)備

恒冷箱切片：將冷凍的組織塊置于切片機(jī)的冷凍臺(tái)上，調(diào)節(jié)至適宜溫度（-15℃至-20℃），使用專用刀片進(jìn)行切片，厚度通常控制在4-10微米。

組織貼片：切好的薄片需立即貼附在預(yù)冷的載玻片上，確保組織片的完整性和位置固定。

3. 固定與處理

固定：切片后，室溫晾干，然后用冷丙酮固定10分鐘，以穩(wěn)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)和抗原。

洗滌：用PBS（磷酸鹽緩沖液）洗滌3次，每次5分鐘，去除固定劑。

抗原修復(fù)：對(duì)于某些需要抗原修復(fù)的實(shí)驗(yàn)，將切片置于特定的修復(fù)液（如EDTA）中，通過(guò)微波或煮沸處理，恢復(fù)被固定劑封閉的抗原位點(diǎn)。

4. 阻斷與封閉

內(nèi)源性酶抑制：使用3%過(guò)氧化氫溶液在室溫下避光孵育25分鐘，以減少內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的干擾。

封閉：用BSA（牛血清白蛋白）或正常動(dòng)物血清在組織周圍畫圈封閉，防止非特異性結(jié)合，室溫下封閉30分鐘。

5. 抗體孵育

一抗孵育：將切片置于含有適當(dāng)稀釋的一抗的溶液中，4°C孵育過(guò)夜，以確保充分結(jié)合目標(biāo)抗原。

二抗結(jié)合：洗滌去除未結(jié)合的一抗后，加入標(biāo)記的二抗（如HRP或熒光標(biāo)記），室溫孵育一定時(shí)間。

6. 顯色與染色

DAB顯色或熒光染色：對(duì)于DAB顯色，經(jīng)過(guò)二抗處理后，使用DAB試劑顯色，觀察到棕色沉淀即為陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)于熒光染色，直接觀察熒光信號(hào)。

核染色：通常使用DAPI進(jìn)行核染色，以提供細(xì)胞核的定位信息。

7. 結(jié)果觀察與分析

干燥與封片：切片干燥后，使用中性樹膠或其他封片劑封片，防止熒光淬滅。

顯微鏡檢查：在熒光顯微鏡或光學(xué)顯微鏡下觀察，記錄圖像，分析抗原分布或細(xì)胞結(jié)構(gòu)特征。

注意事項(xiàng)

溫度控制：整個(gè)過(guò)程中，特別是切片和固定步驟，溫度控制至關(guān)重要，以避免組織損傷和抗原損失。

操作精細(xì)：每一步操作都需細(xì)致，避免組織片的損壞或抗原的非特異性結(jié)合。

標(biāo)準(zhǔn)化流程：確保每一步的條件（如固定時(shí)間、抗體濃度）標(biāo)準(zhǔn)化，以提高實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。

評(píng)論 / 文明上網(wǎng)理性發(fā)言
12條評(píng)論
全部評(píng)論 / 我的評(píng)論
最熱 /  最新
全部 3小時(shí)前 四川
文字是人類用符號(hào)記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具。現(xiàn)代文字大多是記錄語(yǔ)言的工具。人類往往先有口頭的語(yǔ)言后產(chǎn)生書面文字，很多小語(yǔ)種，有語(yǔ)言但沒(méi)有文字。文字的不同體現(xiàn)了國(guó)家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會(huì)。
點(diǎn)贊12
回復(fù)
全部
查看更多評(píng)論
相關(guān)文章

一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應(yīng)用技術(shù)

2023-10-08

熱重分析（TG-DTG）曲線的幾種解析方法

2023-12-26

接觸角測(cè)試（CA）的原理、樣品制備要求及實(shí)際應(yīng)用

2023-11-16

恒電流間歇滴定法GITT的基本原理以及測(cè)試教程

2022-08-12

一文詳細(xì)介紹he染色的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

2023-11-23

TMA技術(shù)的基本概念、應(yīng)用領(lǐng)域以及實(shí)際操作中的要點(diǎn)

2023-12-06

項(xiàng)目推薦/Project
免疫組化（IHC）

免疫組化（IHC）

免疫熒光（IF）

免疫熒光（IF）

冷凍切片

冷凍切片

熱門文章/popular

基礎(chǔ)理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結(jié)構(gòu)）

手把手教你用ChemDraw 畫化學(xué)結(jié)構(gòu)式：基礎(chǔ)篇

晶體結(jié)構(gòu)可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

電化學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之電化學(xué)工作站篇 （二）三電極和兩電極體系的搭建 和測(cè)試

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

微信掃碼分享文章
主站蜘蛛池模板： 浏阳市| 琼中| 永年县| 海兴县| 海门市| 安国市| 凉城县| 滦南县| 奇台县| 莎车县| 兴化市| 巴林右旗| 涿州市| 平利县| 望城县| 鹿泉市| 金昌市| 婺源县| 临猗县| 叙永县| 镇江市| 盐池县| 壶关县| 资源县| 吉隆县| 宜兰市| 遵化市| 鹿泉市| 嘉善县| 肥东县| 淮阳县| 平度市| 哈巴河县| 丰原市| 东丽区| 改则县| 称多县| 南澳县| 安吉县| 盈江县| 浦城县|