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石蠟切片技術里常用的染色法——HE染色
來源: 時間:2024-11-07 10:14:41 瀏覽:2200次

石蠟切片技術里常用的染色法——HE染色

 

石蠟切片技術是一種廣泛應用于病理學、生物學等領域的制片技術,通過對生物組織進行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、貼片、烤片等一系列處理,制備出可供顯微鏡觀察的薄切片;在石蠟切片的觀察中,染色是至關重要的一步,它可以使組織結構更加清晰,便于研究人員進行觀察和分析;HE染色,即蘇木精-伊紅染色,是石蠟切片技術中最常用的染色方法之一。

一、原理

HE染色利用蘇木精(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)兩種染料的親和力不同,對細胞的不同成分進行著色;蘇木精是一種堿性染料,能夠與細胞核中的酸性物質(如核酸)結合,使細胞核呈藍色或紫色;伊紅是一種酸性染料,能夠與細胞質中的堿性物質(如蛋白質)結合,使細胞質呈紅色或粉紅色。

二、步驟

1.脫蠟:將石蠟切片放入二甲苯中,去除切片上的石蠟,使其透明。

2.梯度酒精脫水:將脫蠟后的切片依次放入高濃度到低濃度的酒精中,以去除二甲苯,使切片適應水環境。

3.水洗:用蒸餾水清洗切片,去除殘留的酒精。

4.蘇木精染色:將切片放入蘇木精染液中,通常在室溫下染色5-10分鐘。

5.水洗:用蒸餾水清洗切片,去除多余的蘇木精染液。

6.分化:將切片放入1%的鹽酸酒精中分化,直至細胞核顏色清晰,背景幾乎無色。

7.水洗:再次用蒸餾水清洗切片,停止分化。

8.返藍:將切片放入弱堿性溶液中(如碳酸鋰溶液),使細胞核顏色更加鮮艷。

9.伊紅染色:將切片放入伊紅染液中,通常染色1-3分鐘。

10.水洗:用蒸餾水清洗切片,去除多余的伊紅染液。

11.梯度酒精脫水:將切片依次放入低濃度到高濃度的酒精中,去除水分。

12.透明:將脫水后的切片放入二甲苯中,使其透明。

13.封片:用中性樹膠或加拿大樹膠封片,覆蓋玻片。

三、注意事項

1.染液濃度和染色時間:染液濃度和染色時間需要根據組織類型和切片厚度進行調整,以達到最佳染色效果。

2.分化時間:分化時間不宜過長,以免過度分化導致細胞核顏色過淡或消失。

3.返藍時間:返藍時間不宜過長,以免細胞質著色受到影響。

4.切片脫水:在梯度酒精脫水過程中,應確保切片完全脫水,以免影響透明和封片。

5.封片:封片時,應避免氣泡的產生,確保切片與蓋玻片之間無空氣。

四、應用

HE染色因其簡單、快速、結果可靠等特點,被廣泛應用于病理學診斷、生物學研究等領域通過HE染色,可以清晰地觀察到細胞核和細胞質的形態結構,對于判斷組織的正常與否、病變性質和程度具有重要意義。

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全部 3小時前 四川
文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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