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透射電鏡測試之負染色制樣技術詳解
來源: 時間:2024-09-26 09:48:50 瀏覽:4897次

透射電鏡測試之負染色制樣技術詳解

 

透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscopy, TEM是一種高分辨率的顯微鏡,能夠觀察到樣品的納米級結構負染色制樣技術是一種在TEM觀察中常用的樣品制備方法,特別適用于病毒、蛋白質、納米顆粒等微小生物樣品的觀察。

一、原理

負染色技術是一種利用重金屬鹽溶液對樣品進行染色,使背景電子密度增加,而樣品本身保持低電子密度,從而在TEM圖像中形成負反差效果的方法;這種技術能夠提高樣品與背景之間的對比度,使樣品的結構細節更加清晰。

二、操作步驟

1. 樣品準備:首先,需要將待觀察的樣品進行適當的稀釋,以便于在TEM網格上形成單層或低密度分布的樣品。

2. 網格準備:選擇合適的TEM網格,通常為碳支持膜網格將網格放在TEM專用濾紙上,用移液槍吸取少量樣品滴在網格上。

3. 滴加染色劑:在網格上滴加適量的重金屬鹽溶液作為染色劑常用的染色劑有磷鎢酸(PTA)、醋酸鈾等。

4. 吸附和干燥:讓染色劑在網格上吸附一段時間,然后用濾紙吸去多余的染色劑,使樣品干燥。

5.TEM觀察:將制備好的負染色樣品放入透射電子顯微鏡中,調整適當的加速電壓和放大倍數,進行觀察。

三、注意事項

1. 樣品濃度:樣品的濃度需要適中,過高的濃度會導致樣品堆積,過低的濃度則可能觀察不到樣品。

2. 染色劑選擇:不同的染色劑適用于不同類型的樣品,應根據樣品的特性選擇合適的染色劑。

3. 染色時間:染色時間不宜過長,以免染色劑過度滲透樣品,導致樣品結構變形或破壞。

4. 干燥過程:干燥過程應避免樣品的污染和破壞,操作要輕柔,避免振動。

四、應用

1. 病毒觀察:負染色技術是觀察病毒顆粒的常用方法,可以清晰地顯示病毒的形態和結構。

2. 蛋白質分析:負染色技術可以用于觀察蛋白質晶體和蛋白質復合物的結構。

3. 納米顆粒:對于納米材料的研究,負染色技術能夠提供顆粒的形態和分布信息。

4. 細胞組分:負染色技術可以用于觀察細胞器的結構,如線粒體、內質網等。

五、結論

負染色制樣技術是一種簡單、有效的TEM樣品制備方法,它通過增加背景電子密度,使樣品在TEM圖像中呈現出負反差效果,從而提高了樣品的可見性和對比度,這種技術對于觀察微小生物樣品和納米材料具有重要作用;然而,負染色技術也有其局限性,如染色劑可能對某些樣品造成破壞,染色效果受多種因素影響,因此,在實際操作中,需要根據樣品的特點和實驗目的,優化實驗條件,以獲得最佳的觀察效果;隨著透射電鏡技術的發展,負染色制樣技術也將不斷完善,為科學研究提供更強大的支持。

 

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全部 3小時前 四川
文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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