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一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項
來源: 時間:2023-11-23 16:18:24 瀏覽:16547次

一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

 

HE染色法,又稱蘇木素-伊紅染色法,是一種廣泛應用于組織學、胚胎學和病理學教學與科研中的染色方法。




一、基本原理

HE染色法利用兩種染料,即堿性染料蘇木素和酸性染料伊紅,分別與細胞核和細胞質發生作用,使細胞的微細結構通過顏色改變其折光率,從而在光鏡下清晰地呈現出細胞圖像。染色過程中既有化學反應,又有物理作用參與。

從化學反應來看,組織細胞內含有酸性物質和堿性物質。細胞的酸性物質與堿性染料的陽離子結合,細胞核的堿性物質與酸性染料的陰離子結合。因此,酸性細胞核被堿性的蘇木素染成藍色,而堿性的胞漿被酸性染料伊紅染成紅色。從物理現象來看,主要有吸附和吸收之說。HE染色提供良好的核漿對比染色,是細胞化學染色中最常用的一種方法。

 

二、實驗步驟

1. 樣品制備:對于貼壁生長細胞,胰酶消化,調整細胞濃度約1105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養相應時間后,取出細胞爬片,用PBS洗滌3次。

2. 樣品固定:95%乙醇固定20minPBS洗滌2次,每次1min

3. 染核:蘇木素染液染色2-3min,自來水洗滌。

4. 分色:鏡下觀察,若細胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數秒,自來水洗滌。

5. 染胞質:浸入伊紅染液染色1min,自來水洗滌。

6. 吹干或自然晾干細胞爬片后,中性樹膠封片。

若細胞用4%多聚甲醛固定,則染色時間相應延長,蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可。

 

三、注意事項

1. 染色時調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2. 切片染蘇木精后,分色這一步是關鍵,應在顯微鏡下控制進行。一般以細胞核染色清楚(晰)而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺,應重新染色后再行分色。

3. 切片經酒精脫水后,入二甲苯時可出現白色不透明狀態,此為脫水不徹底,應將切片退回無水酒精,重新脫水。

4. 脫蠟。切片脫蠟后才能染色,且脫蠟應徹底。脫蠟好壞主要取決于二甲苯的溫度和時間。如果二甲苯是用過一段時間,切片又比較厚,室溫低應增加脫蠟時間。

5. 在染色過程中,各種試劑的使用順序、濃度和時間應嚴格按照實驗步驟操作,以免影響染色效果。

6. 實驗結束后,要清潔實驗臺和儀器設備,妥善保存試劑,以免影響下次實驗。

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全部 3小時前 四川
文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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