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氨基酸分析儀的介紹和基本原理、應用

來源：時間：2022-12-05 10:35:25 瀏覽：5714次

氨基酸分析儀的介紹和基本原理、應用

用來進行蛋白質、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的測定的儀器，稱為氨基酸分析儀。必須先蛋白質及肽水解成單個氨基酸，然后再進行氨基酸分析。其是以陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測定為基準的離子交換色譜儀。
和普通HPLC相比較，儀器有著相似的基本結構。然而針對氨基酸分析進行了如氮氣保護、惰性管路、在線脫氣、洗脫梯度及柱溫梯度控制等細節優化。

簡介

基本原理

氨基酸混合物在流動相（緩沖溶液）的推動下從裝有陽離子交換樹脂的色譜柱流經流經，各氨基酸與樹脂中的交換基團交換離子。當洗脫時使用的pH緩沖溶液不同時，氨基酸混合物由于不同的交換能力而分離，分離出的單個氨基酸組分與茚三酮試劑發生反應，生成紫色化合物或黃色化合物，其在570nm、440rnn的吸光度用可見光檢測器進行檢測。這些有色產物對應的吸收強度與洗脫出來的各氨基酸濃度之間的關系和朗伯-比爾定律相符合。以此為依據可以定性、定量分析氨基酸各組分氨基酸分析儀也可利用陰離子交換分離后經積分脈沖安培法檢測。此檢測方法不需要柱前或柱后衍生待測氨基酸。

系統

一般細分為蛋白水解分析系統（鈉鹽系統）和游離氨基酸分析系統（鋰鹽系統）兩種系統。梯度洗脫利用不同濃度和pH值的檸檬酸鈉或檸檬酸鋰來進行。在這當中，鈉鹽系統每次分析的氨基酸至多能夠達到大約25種。有比較快的速度以及比較好的基線平直度；鋰鹽系統每次分析的氨基酸至多能夠達到大約50種，然而和鈉鹽系統相比，速度比較慢，也沒有較好的基線平直度。

效果

相比較于目前已知的氨基酸分析方法，和HPLC柱前衍生方法相比較，除了靈敏度（Zdi檢測限）稍低以外，在如分離度、重現性、操作簡便性、運行成本等其他方面，都比其他分析方法要好。

特點

1、高靈敏度:

按照蛋白水解液標準作為例子，能夠檢測到3pmoL。

2、快速、高分辨率:

水解氨基酸僅需半個小時的分析時間，生理體液僅需110分鐘。

3.柱后衍生技術：

和氨基酸反應之前才混合兩種反應液，使反應液的使用期限得到了有效的延長，并且不需要額外的制冷裝置存放。

4、氨氣排除系統:

除氨柱増加了，能夠將氨在分析過程中對基線及峰形的干擾很好地進行排除。

應用